维普资讯 http://www.cqvip.com 第２９卷第２￣ＪｔＪ 酿 酒 Ｖｏ１．２９．Ｎｏ．２ Ｍａｒ．。２００２ ２ ０ ０ ２年３月 ＬＩＱＵＯＲ ＭＡＫＩＮＧ 文章编号：１００２—８１１０（２００２｝０２—００８８—０２ 用ＨＰＬＣ法测定干红葡萄酒中的酚类物质 于 贞 ，赵光鳌 ，李记明２，帅桂兰 （１．无锡轻工大学生物工程学院江苏，无锡，２１４０３６；２．烟台张裕葡萄酿酒有限公司技术中心，山东，烟台，２６４００１） 摘要：建立了用ＨＰＬＣ测定干红葡萄酒中１１种酚类物质的方法。该法具有定量准确，快速的特点。在实验 条件下，各物质的含量与峰面枳呈良好的线性关系，且回收率较高。 关键词：｝ Ｌｃ；酚；回收率；红葡萄酒 中图分类号：ＴＳ２６２．６；０６５７．７ ０前言 文献标识码：Ｂ 冷却后，用２０ｍＬ乙酸乙酯萃取两次，有机相再次浓缩至干 后，残渣溶于２．５ｍＬ甲醇中。此为酸性酚。 ２酸性酚色谱条件的确定 ２．１色谱条件 酚类化合物是葡萄酒中的非常重要的组成成分，它们在 很大程度上决定了酒的感官特性。在葡萄酒酿造的整个过 程中，发生着复杂的化学变化。葡萄酒中酚的种类和含量主 要与葡萄的种类、气候条件、葡萄的成熟度及在酿造葡萄酒 时所采用的技术＿】Ｊ。酒中的酚种类繁多，大部分以结合态和 聚合度不同的聚合态形式存在，且含量多少不一，要准确地 分析所有酚的含量是很困难的。因此建立酚类物质的测定 以８０％甲醇（含甲酸０．１％）和０．１％甲酸水溶液为流动 相，进样量为１０ ，流速ｌｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２８０ｎｍ，通过改变 甲醇的梯度达到各物质分离的目的。 ２．２定性 方法，准确分析葡萄酒中各主要酚的含量，明确酒中各种酚 的变化情况对酒的感官品质的影响程度，是本文所要解决的 主要问题。 将８种单酚酸分别配成甲醇溶液，在同一色谱条件下分 别进样，确定标准物质的保留时间，顺序依次为没食子酸 （１１．９２４ｒａｉｎ）、原儿茶酸（１７．７９５ｒａｉｎ）、绿原酸（２５．９７２ｎｆｉｎ）、咖 啡酸（ｃｉｓ一＆ｔｒａｍ一２７．７４８ｍｉｎ，２８．６９８ｒａｉｎ）、Ｐ一香豆酸（ｃｉｓ一 ＆ｔｒａｍ一３３．２７４ｒａｉｎ ３４．２９０ｎｆｉｎ）、阿魏酸（３５．６４２ｍｉｎ）、Ｏ一香豆 最常用的分析酒中总多酚的方法是Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ和Ｒｏｓｓｉ采 用的福林一肖卡试剂，现被Ｋｒａｍｌｉｎｇ和Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ加以修改以 便能测出非黄烷酚、总酚和黄烷酚ｎ Ｊ。最近，高效液相色谱 法被用来分析白葡萄酒中的单酚。干红葡萄酒由于工艺上 的差异，与干白葡萄酒相比，其酚类物质的分析更为复杂，大 量花色苷的存在，影响了其他酚类物质的测定，本文采用乙 酸乙酯进行前处理以消除花色苷的影响，利用ＨＰＬＣ来分析 干红葡萄酒中的单酚。 １实验材料与方法 １．１实验材料 酸（３６．７８９ｎｆｉｎ）和丁香酸（４ｏ．５７８）。将标准样配成混合溶液， 用增高法定性。 ２．３溶剂对测定的影响 在相同的色谱条件下，乙酸乙酯没有吸收峰，说明所用 的试剂对测定结果没有影响。 ２．４标准曲线的制作 称取约０．０１００ｇ没食子酸、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、Ｐ 一香豆酸、阿魏酸、Ｏ一香豆酸、丁香酸溶于甲醇中，定容于 解百纳干红葡萄酒 乙酸乙酯（分析纯） 甲醇（色谱纯） 甲酸（分析纯） 所有标样均从Ｓｉｇｍａ购得。 １．２实验方法 １０ｍＬ容量瓶中。稀释成不同的梯度，进样量１０ｖＬ，在实验过 程中根据需要调整浓度，作标准曲线，并确定各标样的最小 检测限。８种物质的标准曲线均以峰面积对浓度作图。样 品中各物质的浓度查标准曲线求得。酒中８种酚酸的最小 检测限分别为没食子酸０．０２０６ｎｅ／Ｌ、原儿茶酸０．０１１３ｍｇ／Ｌ、 绿原酸０．０５７ｍｇ／Ｌ、咖啡酸０．０９８ｎ，ｇ／Ｌ、Ｐ一香豆酸 ０．０１０９ｎ￣，／Ｌ、阿魏酸０．０５６ｎ￣，／Ｌ、０一香豆酸０．０６１ｎｃ／Ｌ、丁香 酸０．０８２ｍｇ／Ｌ。Ｏ一香豆酸和没食子酸的标准曲线如图１所 刁 ： 样品的处理 取２０ｍＬ酒样，用１ｍｏｌ ＮａＯＨ调ｐＨ７．０，加６０ｍＬ乙酸乙酯 萃取三次，有机相真空浓缩至干，残渣溶于２．５ｍＬ甲醇中。 此为中性酚。 ２．５各酚酸回收率的测定 水相再用ｌｍｏｌ ＨＣＩ调ｐＨ２．０，加６０ｍＬ乙酸乙酯萃取三 次，有机相真空浓缩至干，加１２ｍＬ ２ ｍｏｌ Ｈｃ１沸水浴水解１ｈ， 收稿日期：２ＯＯ２—０１—０８ 作者简介：于贞，女，（１９７３一），山东烟台人，在读硕士，主要 在干红葡萄酒样中分别加入一定量的各酸性酚标样，样 品按本文所述的方法进行前处理和ＩｑＰＬＣ测定，计算回收率 得原儿茶酸为９１．１７％，没食子酸为８７．８３％，绿原酸为 ９６．３０％，咖啡酸为８６．１７％，阿魏酸为９７．５５％，Ｐ一香豆酸为 ９６．６８％，Ｏ一香豆酸为９４．５２％，丁香酸为８５．８９％。 从事功能性物质的分离与提取方面的研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com 第２期 １７５０ 于 贞，等：用ＨＰＬＣ法测定干红葡萄酒中的酚类物质 ・８９・ 进样量１Ｏ ，在测定过程中根掘需要调整浓度，测定标准曲 线和最小榆测限洒样中（±）一儿茶素、芦丁和槲皮累的 小 检测限分别为０．０８３８ｒａｇ／Ｌ、０．０７２５ｍｇ／Ｌ和０．０８１３ｇ／Ｌ。 ３．４各中性酚回收率的测定 兰１５００ １２５０ 一 ２５０ Ｏ 在干红葡萄酒样中分别加入一 ｌ０ ２０ ３０ ４０ 的各中性酚标样，样 Ｏ 品按本文所述的方法进行前处 弧Ｉｌｌ，ｎ 测定，各物质的刚 收率分别为儿茶素９２，９８％．芦Ｊ ８８．４５％，槲皮素９２．７５Ｖ， ，４测定实例 浓度（ｍｇ／Ｌ） ｏ．香豆酸标准曲线 一８０００ 测定酒中各种酚的含量血 ：表所示： 表１ 酒中中性酚的含量 ｒｉｒｇ／Ｉ． １；？７０００ 毛６０００ ５０００ 暑ｓ ４０００ 匿３０００ 警２０００ １０００ ＯＯ ＩＯ０ ２００ ３００ 表２ ４００ 酒中酸性酚的含量ｒｎｇ／ 浓度（ｍｇ／Ｌ） 没食 子酸 ４３．】４ 没食子酸标准曲线 绿原酸咖啡酸 酸阿魏酸嘉酸丁香酸 １．４４ １．２６ １．Ｏ １．，１ Ｏ．５６ １．１９ １．１９ 图Ｉ 。一香豆酸和没食子酸的标准曲线 ３中性酚色谱条件的确定 ５结论 芦丁、（±）一儿茶素、槲皮素在紫外均有两个吸收带，芦 丁最大吸收峰分别为３５９ｎｍ和２９３ｎｍ，（＋）一儿茶酸分别为 ５．１本文主要确定了１１种酚类的测定方法。由于不同的 酚在不同的ｐＩ｛下呈不同的状李存在，在ｐｌ｛＝７的条件下， 酸性酚呈离子状态，在ｐＨ＝２时，酸性酚呈分子状态，而中性 ２７５ｎｍ和２６３ｎｍ，槲皮素分别为３７１ｎｍ和２８０ｎｍ，为了能同时 测定三种物质的含量，确定紫外检测波长为２８０ｎｍ。 ３．１色谱条件 酚在两个条件下均为分子态，因此，为把酸性酚和中性酚分 开测定，选在ｐＨ＝７的条件下用乙酸乙酯把中性酚萃取出 来，再在ｐＨ：２条件下把酸性酚萃取出来。 ５．２在选定的色谱条件下，各物质的峰得到了较好的分离， 以０．１％甲酸水溶液和８０％甲醇（含甲酸０．１％）为流动 相进行梯度洗脱，进样量为１０ｐｔＬ，流速１ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长 ２８０ｍｎ。 通过增高法参照保留时间进行定性，用外标法进行定量，经 回收率实验验证，该法的准确度较高，用此法测定酒中ｌ】种 物质的含量，结果正确、可信 ５．３回收率均在８７％以上，该法的可行性好。 ５．４最小检测限均较低，说明该法的灵敏度高。 ３．２定性：将芦丁、儿茶素和槲皮索标样分别配成甲醇溶 液，在同一色谱条件下进样，确定儿茶素、芦丁和槲皮素的保 留时间分别为２４．３７３ｒａｉｎ、４０．８９７ｒａｉｎ和钙．７２２ｍｉｎ。用增高法 确定样品在２４、０、４４８ｍｌｎ出现的峰就是要测的三种物质。 ３．３标准曲线的制作和最小检测限的确定 ［参考文献］ ［Ｉ １Ｉｌｌｌｌｌ＇Ｊｅ—Ｈｅｌ￣ｅ Ｓａｌａｇｏｉｔｙ—Ａｕｇｕ￣ｅ ａｎｔ｛Ｍａｉｎ Ｂｅｒｔｒａｎｄ．Ｗｉｎｅ Ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ —准确称取Ｏ．００５０ｇ（４－）一儿茶素、芦丁、槲皮索溶于甲醇 中，定溶于１０ ｍＬ容量瓶，然后稀释成不同的梯度， Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｌｏｗ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗ‘ ｉ西】：￣：￣ａｐｏｎｅｎｔｓ ｂｙ Ｈｉ出Ｐｅｒｆｏｍｕｍｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍ￣ｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］，Ｊ．ｓｃｊ．Ｆ（Ｈ｛Ａ ｃ．，１９８４，（３５）：１２４１． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｏｎｏｌｉｃｓ ｏｆ Ｄｒｙ Ｒｅｄ Ｗｉｎｅ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｉ７／Ｚｈｅｒｔ ．ＺＨＡＯ Ｃ￣ｔａｒｒｇ一∞ ．ＬＩ ｊｉ—ｍｉｎｇ ＳＨＵＭ Ｇｔｕ：一／ａｎ （Ｉ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｃｈｎｏｌｅｏｇｙ，Ｗｕｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｇｈｔ ｌｎｄｍ￣＇，Ｗｕｘｉ ２１４０３６，Ｃ＇ｈｉ￣ｍ ２．Ｃｅｎｔｒｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔ￣ｈｎｏｌｏｇｙ ＣｈａｎｇＹｕ ＧｒｏｕＩ，Ｃｏ．，Ｉ ，Ｙａｎｔａｉ ２６４００１，Ｃｈｉ，ｍ） Ａｌ ｎ ＣＴ：Ａ ｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｉｔｖｅ ｍｅｔｈｔｘｌ、￣ａｓ ｅｓｔａｂｆｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ Ｉ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ ｉｎ ｄｒｙ ｒｅｄ ｗｉｎｅ ｂｙ Ｉ－ＩＰＬＣ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．ｔｈｅ ｃａｉｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖ￣ｗｅｒｅ ｈｎｅａｒ ｗｉｈ ｒ＞（ｔ）．９９ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｆ，￣．１ｖｅｌ－Ｊｅｓ ｏｆｔｈｅ ｐｈｅｎｏｆｉｃｓ＞８５％ ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ＨＰＩ＿Ｅ；ｐｈｅｎｏｌ；ｒｅｃｏｖｅｒｙ，ｒｅｄ ｗｉｎｅ